【前言简介】
衣原体是一种无运动性、革兰氏阴性和强制性的细胞内生长细菌,在寄生细胞的细胞质中形成特征性包涵体。它们在光学显微镜下很容易看到。已知三种对人类有致病性的衣原体:沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体,其中一种仅对动物有致病性。沙眼衣原体是全世界性传播疾病最常见的病原体(4-5亿例),感染人数不断增加。感染沙眼衣原体的孕妇可能在分娩期间传播这些细菌,导致新生儿结膜炎或肺炎。衣原体感染未经治疗可导致慢性输卵管炎,可能导致异位妊娠或不孕。在男性中,沙眼衣原体是非淋菌性尿道炎的主要原因。衣原体感染的一个严重问题是频繁的无症状潜伏过程,这可能导致慢性疾病的发生。在许多情况下,原发性感染未被识别,只有上升的持续性病原体引起的后遗症才被诊断出来。
【检测原理】
特异性抗体的定性免疫酶学测定是基于ELISA(酶联免疫吸附试验)技术。微孔板上包被特定的抗原,以结合样品的相应抗体。洗涤微孔以去除所有未结合的样品材料后,添加酶联物(HRP),与捕获的抗体结合。在第二个洗涤步骤中,未结合的共轭物被去除。通过加入四甲基联苯胺(TMB)底物,得到蓝色反应产物,可以观察到结合结合物形成的免疫复合物。该产品的强度与样品中特异性抗体的数量成正比。加入终止液以终止反应,蓝色变成了黄色。使用酶标仪器读取450/620nm处的吸光度。
【试剂盒组成】
1)微孔板 12x8,包被沙眼衣原体抗原
2)样品稀释液 1×100ml,磷酸盐缓冲液(10mM),pH 7.2 ± 0.2,含抗人IgA/IgG/IgM(RF吸附剂),即用型
3)终止液 1×15ml,硫酸,0.2mol/L,即用型
4)洗涤浓缩液 20倍浓缩,磷酸盐缓冲液(0.2M),1×50ml,pH 7.2 ± 0.2
5)酶联物 1×20ml,过氧化物酶标记的人IgA/IgG/IgM抗体,即用型
6)底物液 1×15ml,3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),即用型
7)阳性质控 1×2ml,即用型
8)临界质控 1×3ml,即用型
9)阴性质控 1×2ml,即用型
10)封板纸 1x
11)使用说明书 1x
【所需的材料和设备】(未提供)
1)酶标仪
2)37℃培养箱
3)手动或自动洗板装置
4)移液器:10-1000µL
5)涡旋混合器
6)蒸馏水
7)一次性试管
【储存条件】
试剂盒必须储存于2-8℃的环境中,打开的试剂在标签上规定的有效期内是稳定的。
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