【前言简介】
由于其疏水性，25-羟基维生素D和其他维生素D代谢产物在结合蛋白上循环。约90%的25-羟基维生素D与所谓的VDBP或DBP结合。剩下的10%与白蛋白结合，白蛋白是人体血浆的主要蛋白。尽管白蛋白对25-羟基维生素D的亲和力远低于VDBP的亲和力，但高浓度的白蛋白弥补了这一差异。占25-羟基维生素D总浓度0.04%的一小部分以游离形式循环。25-羟基维生素D在细胞内转化为生物活性的1,25-二羟基维生素D，因此需要从细胞外液中内化25-羟基生素。可能涉及不同的转运机制，其中一些机制将游离配体的浓度作为重要参数之一。在这些情况下，25-羟基维生素D游离的部分与维生素D的生物活性有关，因此可能比25-羟基维生素D的总浓度更好地反映维生素D的生理作用。
游离25-羟基维生素D的部分约占25-羟基维生素C总浓度的0.04%。然而，这个百分比不是恒定的，根据不同的条件而变化。尽管白蛋白的水平在个体间趋于稳定，但VDBP的浓度会在多种条件下波动，因此会影响游离25-羟基维生素D的含量。妊娠导致VDBP水平增加约50%，而例如，肝衰竭和慢性肾病都导致VDBP浓度降低约50%。在结合蛋白浓度升高的情况下，25-羟基维生素D的游离部分较低，反之亦然。在这些条件下，以及在后面列出的条件下，游离25-羟基维生素D的测量可能比传统的总25-羟基维生素D的测量更能反映维生素D的活性。除了可变浓度外，VDBP还以不同的多态形式存在。不同VDBP形式对25-羟基维生素D的亲和力可能有所不同，尽管这仍在争论中。对25-羟基维生素D具有高亲和力的多晶型将减少可用的25-羟基维生素D的游离部分。相反，低亲和力VDBP形式将导致更高水平的游离25-羟基维生素D。
【检测原理】
本试剂盒是基于两步法酶联免疫检测。在第一次孵育步骤中，游离25-羟基维生素D（25-羟基维生素D2和D3）与包被在微孔板上的抗维生素D抗体结合，游离和结合的25-羟基维生素D之间的体内平衡受到最小干扰。洗涤步骤后，加入一定量的生物素化25-羟基维生素D。通过洗涤除去未结合的材料后加入链霉亲和素-过氧化物酶结合物。在下一个步骤中加入TMB底物液，最后加入终止液终止反应，并用酶标仪测量450nm处的吸光度。样品中的游离25-羟基维生素D浓度（pg/mL）与其吸光度呈反比。
【试剂盒组成成分】
1）微孔板： 12x8，抗VD包被板，包被小鼠抗25OH D2/D3单克隆抗体
2）样品稀释液： 1×12ml，即用型
3）生物素化抗原： 浓缩， 1×250 µL
4）链霉亲和素-HRP结合物： 1×12ml，即用型
5）标准品（1-6）： 冻干，6瓶
6）质控品1： 冻干，1瓶
7）质控品2： 冻干，1瓶
8）洗涤缓冲液： 冻干，2片
9）底物液： 1×12ml，即用型
10）终止液： 1x12ml，即用型
11）生物素化抗原稀释液： 1x14.5ml，即用型
